一、乙肝动物模型构建实验动物选择
1. 常用动物模型及特点
| 模型类型 | 动物 | 优点 | 缺点 | 适用研究 |
|---|---|---|---|---|
| 自然感染模型 | 黑猩猩（Chimpanzee） | 最接jin人类HBV感染 | 伦理限制、成本ji高 | 基础研究（已基本弃用） |
| 人源化肝脏小鼠 | FRG/FRGN、uPA/SCID、TK-NOG | 支持HBV感染和复制 | 免疫缺陷、需人肝细胞移植 | 药物评价、病毒生命周期 |
| HBV转基因小鼠 | HBV-Tg（如1.3HBV-Tg） | 稳定表达HBV抗原 | 不模拟自然感染过程 | 免疫耐受机制研究 |
| AAV-HBV转导模型 | C57BL/6、BALB/c | 快速建立HBV持续感染 | 非自然感染方式 | 免疫清除机制研究 |
| 鸭/土拨鼠HBV模型 | 鸭（DHBV）、土拨鼠（WHV） | 可模拟部分HBV特征 | 与人HBV存在差异 | 抗病du药物筛选 |
2. 选择依据
研究病毒复制 → 人源化小鼠 或 AAV-HBV转导模型
研究免疫应答 → HBV-Tg小鼠 或 AAV-HBV模型
药物开发 → 鸭/土拨鼠模型（初筛）→ 人源化小鼠（验证）
二、乙肝动物模型构建模型构建方法
1. 人源化肝脏小鼠模型（接jin人类HBV感染）
步骤：
选择免疫缺陷小鼠（如FRG小鼠：Fah⁻/⁻ Rag2⁻/⁻ Il2rg⁻/⁻）。
移植人肝细胞（原代人肝细胞或HepaRG细胞系）。
HBV感染（静脉注射临床HBV分离株，如基因型A-D）。
监测指标：
血清HBsAg、HBeAg（ELISA）
HBV DNA载量（qPCR）
人肝细胞嵌合率（人Albumin检测）
优缺点：
优点：支持完整HBV生命周期（cccDNA形成、病毒分泌）。
缺点：成本高、需专业移植技术。
2. AAV-HBV转导模型（快速建立持续感染）
步骤：
选择AAV血清型（如AAV8，靶向肝脏）。
构建AAV-HBV载体（含1.3倍HBV基因组，如pAAV-HBV1.3）。
尾静脉注射（剂量：10¹¹–10¹² vg/只）。
监测指标：
血清HBsAg（持续6个月以上）
肝内HBV DNA/RNA（qPCR）
优缺点：
优点：操作简单、成本低。
缺点：非自然感染，无cccDNA形成。
3. HBV转基因小鼠（研究免疫耐受）
常用品系：
1.3HBV-Tg：完整HBV基因组，高表达HBsAg。
HBV-S-Tg：仅表达HBsAg（模拟慢性携带状态）。
应用：
研究HBV免疫逃逸机制。
评估治疗性疫苗（如打破免疫耐受）。
4. 鸭/土拨鼠HBV模型（替代模型）
鸭乙肝模型（DHBV）：
感染方式：静脉注射DHBV（10⁸–10⁹病毒颗粒）。
监测指标：血清DHBsAg、肝内DHBV DNA。
土拨鼠肝炎模型（WHV）：
应用：评估抗病du药物（如恩替ka韦）。
三、关键检测指标
1. 病毒学指标
血清标志物：
HBsAg、HBeAg（ELISA）
HBV DNA（qPCR，检测下限<10 IU/mL）
肝内HBV标志物：
cccDNA（Southern blot或特异性qPCR）
HBcAg（免疫组化）
2. 免疫学指标
T细胞应答：
HBV特异性CD8⁺ T细胞（流式检测MHC多聚体）
IFN-γ ELISPOT（肽段刺激）
体液免疫：
抗-HBs抗体（评价疫苗效果）
3. 病理学分析
肝组织HE染色：炎症、纤维化。
天狼星红染色：肝纤维化程度。
四、注意事项
1. 生物安全
HBV操作需在 BSL-2 实验室进行。
人源化小鼠排泄物可能含HBV，需严格管理。
2. 模型局限性
人源化小鼠：缺乏完整免疫系统，难模拟免疫清除期。
AAV-HBV模型：无cccDNA，不能评估靶向cccDNA的药物。
3. 对照设置
阴性对照：空载体注射或野生型小鼠。
阳性对照：已知抗病du药物（如替nuo福韦）。
五、应用示例
药物评价：人源化小鼠中测试 GS-9620（TLR7激动剂） 对HBV的抑制作用。
免疫机制：AAV-HBV模型研究 PD-1抗体 对T细胞功能的恢复作用。
疫苗开发：HBV-Tg小鼠评估 治疗性疫苗（如HBsAg-抗体复合物疫苗）。
