一、青光眼动物模型构建分类与选择
1. 高眼压模型（模拟原发性开角型青光眼）
| 模型类型 | 适用动物 | 造模方法 | 优缺点 |
|---|---|---|---|
| 激光诱导 | 大鼠、小鼠、兔 | - 氩激光光凝房角（需前房注射印度墨汁增强吸收） - 参数：50-100 μm光斑，0.1-0.5 s，50-100 mW | ✅ 可精确控制眼压升高幅度 ❌ 需熟练操作，可能引发炎症反应 |
| 微球注射 | 小鼠、大鼠 | - 前房注射聚苯乙烯微球（10 μm，5-10 μL，阻塞小梁网） - 可联合viscoelastic凝胶延长高眼压 | ✅ 操作简单，眼压稳定维持2-4周 ❌ 需定期监测眼压（Tonolab） |
| 激素诱导 | 兔（新西兰白兔） | - 地s米松滴y液（0.1%，每日2次，持续4-6周） | ✅ 模拟糖皮质激素性青光眼 ❌ 仅适用于兔，眼压升高较缓慢 |
2. 视神经损伤模型（模拟青光眼性视j病变）
| 模型类型 | 适用动物 | 造模方法 | 应用场景 |
|---|---|---|---|
| 视神经钳夹 | 大鼠（SD/Wistar） | - 手术暴露视神经，用显微血管夹（压力50-70 g）夹持5-10秒 | ✅ 直接模拟轴突损伤 ❌ 需开颅操作，损伤不可逆 |
| NMDA兴奋毒性 | 小鼠、大鼠 | - 玻璃体内注射NMDA（20-40 nmol/μL，2 μL）诱导RGC凋亡 | ✅ 快速诱导RGC死亡（24-72小时） ❌ 不涉及眼压升高 |
3. 遗传性青光眼模型
DBA/2J小鼠：自发突变导致虹膜萎s、房角关闭，眼压逐渐升高（6-12月龄）。
特点：模拟原发性闭角型青光眼，需长期观察。
Myocilin突变小鼠：过表达人突变MYOC基因（如Tyr437His），诱导小梁网功能障碍。
二、青光眼动物模型构建关键实验步骤与注意事项
1. 眼压监测
仪器选择：
小鼠/大鼠：TonoLab或Tono-Pen（需麻醉，如异f烷）。
兔：Goldmann压平眼压计（局部麻醉）。
测量频率：造模后每日或隔日测量，持续2-4周。
2. 视网膜神经节细胞（RGC）评估
标记方法：
逆行标记：上丘注射荧光金（FluoroGold），1周后视网膜铺片计数RGC。
免疫染色：Brn3a（RGC特异性标记物）+ DAPI核染。
功能检测：
视网膜电图（ERG）：评估视网膜整体功能（需排除角膜混浊影响）。
模式ERG（PERG）：特异性反映RGC功能。
3. 视神j病理分析
轴突计数：视神经横截面透射电镜（TEM）或甲苯胺蓝染色。
胶质细胞活化：GFAP免疫组化（星形胶质细胞增生标志）。
三、模型验证与数据分析
成功标准：
眼压持续升高>25 mmHg（小鼠）或>30 mmHg（大鼠）超过7天。
RGC数量减少≥30%（对照眼相比）。
对照组设计：
假手术组（仅做角膜穿刺无激光/注射）。
对侧未处理眼（自身对照）。
四、常见问题与解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 眼压升高不稳定 | 微球阻塞不w全/激光能量不足 | 增加微球浓度或激光功率，重复操作 |
| 角膜混浊影响检测 | 激光/注射损伤角膜 | 使用透明角膜膏（如羟丙基甲基纤维素）保护 |
| RGC标记失败 | 逆行标记时间不足 | 延长荧光金扩散时间至7-10天 |
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